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Preguntas mas Frecuentes - ELISA

1. ¿Cuales son las estabilidades de la HRP conjugadas incluidas en los Kits para desarrollar ELISA de PeproTech?
 
    La avidin-HRP incluida en el kit es estable por un mes en un rango de temperaturas de 2-8°C, y por 2 años a una temperatura de -20°C.
    La streptavidina-HRP incluida en el kit para ELISA TMB es estable al menos por seis mesis si se conserva en un rango de temperatura de 2-8˚C.

2. ¿Como puedo encontrar la informacin de cruce de reactividad del kit?


    Peprotech realiza en sus instalaciones los ensayos de cruce de reactividad para sus kits de ELISA. Estos resultados han sido recolectados y los puede encontrar en la hoja tecnica de cada producto.

3. ¿Es posible dejar todo el fin de semana algún paso del protocolo del kit para ELISA?
 

    El anticuerpo de captura se puede adicionar a la placa el viernes y dejar todo el fin de semana siempre que se mantenga a una temperatura de 4°C y reanudar el trabajo el lunes. Es importante recalcar que cambios en los tiempo de incubacion puede causar variablidad en los resultados entre placas.

4. ¿Los kits para ELISA de PeproTech estan disponibles para ser utilizados con todos los tipos de muestras?


    Aunque PeproTech no ha probado todos sus kits en todos los sistemas disponible, sus kits deben ser usados pero no limitados a suero, plasma, sobrenadante de cultivo celular, orina y saliva.
 
5. ¿Se necesita una solucion stop para detener la reaccion?

    Una solución stop no es necesario cuando se utiliza avidin-HRP + ABTS. Esto debido a que en general fiables curvas estandares son obtenidas cuando lecturas de O.D. no exceden 0.2 unidades de la concentración estandar cero o 1. 2 unidades de la concentración estandar más alta. Si se desea utilizar una solucion Stop se pudiera usar SDS al 1% al final de la reacción. En PeproTech no se usan soluciones Stop con los kits de ABTS, aunque la literatura muestra que el SDS es la solución optima para usarse con ABTS. En el caso de los kits TMB una solucion 1 molar de HCl es recomendada.

6. ¿Adicionalmente a la corrección de longitud de onda de 620nm recomendada para los kits de ELISA con TMB, se pudiera utilidar otra longitud de onda?


    Se puede utilizar una correción de onda de 540, 570, 620, or 650nm con el kit de ELISA con TMB.

7. ¿En el caso de los kits de ELISA ABTS PeproTech puedo usar TMB en lugar del ABTS? 

    Este tipo de kit es optimizados utilizando ABTS y por lo tanto es mejor utilizar este substrato. El kit puede ser utilizado con el TMB pero solo despues de hacer algunos ajustes:
  • La avidina-HRP incluida en el kit no puede ser utilizada con TMB y por lo tanto se tendrá que adquirir por separado streptavidina.
  • Las diluciones de streptavidina deberan ser optimizadas.
  • Una solucion stop es necesaria cuando se utiliza streptavidina + TMB. Para lo cual es necesario dirigirse a la hoja tecnica del fabricante de estos productos.
  • El tiempo de reacción del TMB previo a adicionar la solución stop debera ser optimizado.
  • La placa será leida a 450nm con una corrección a 650nm usando las placas correctas.
8. ¿Porque D-manitol es adicionado a los componentes del kit? 

    El D-manitol es adicionado a los componentes del kit con la intencion de ayudar a visualizar mejor la unión proteina/anticuerpo, esto no altera los resultados.
   

9. ¿Puedo utilizar la imagen de curva reportada en la hoja técnica como mi curva estandar?

    Una curva estandar debera correrse por cada placa, en otras palabras la curva de una placa no puede utilizarse en otra placa diferente. La curva que PeproTech incluye en la hoja técnica solo tiene propositos demostrativos de como se trabajo en el laboratorio de PeproTech.

10. ¿Como PeproTech genera sus curvas estandar?

    Cuando una ELISA se corre en el laboratorio de PeproTech un Molecular Devices® plate reader y el  SOFTmax® PRO software son usados. Este último usa los valores recividos y genera una curva de 4 parámetros. 
 
    Aquí incluimos la ecuación que el programa usa:
    4-P Fit:

ELISA 4-Parameter Equation      x = concentración (pg/ml)
     y = O.D. (405nm – 650nm)
     A, B, C, & D corresponden a los 4 parámetros.*
     *Para mas información detallada relacionada a los parámetros
       por favor contacte al Departamento de Soporte Tecnico.